Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un método líder de análisis fisicoquímico para la separación, identificación y cuantificación de componentes en mezclas complejas. Gracias a su precisión, reproducibilidad y versatilidad, la HPLC se ha convertido en una herramienta esencial en las industrias farmacéutica, cosmética, alimentaria, química, medioambiental y de materiales.
¿Qué es HPLC?
La HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) es una técnica cromatográfica que se basa en la separación de analitos en una muestra mediante su interacción con una fase estacionaria (columna) y una fase móvil (disolvente líquido). Permite identificar y cuantificar los componentes de una mezcla con gran sensibilidad, incluso a niveles traza.
La muestra es transportada por un disolvente a alta presión a través de una columna que contiene una fase estacionaria. Cada compuesto migra a una velocidad diferente según su afinidad, generando un cromatograma que puede analizarse mediante un detector (UV, fluorescencia, MS, etc.).
Cómo funciona la cromatografía HPLC
Un sistema HPLC consta de varios módulos integrados:
- Bomba de alta presión: permite que la fase móvil circule por la columna (hasta 400 bares).
- Inyector de muestra: manual o automatizado, la inyección debe ser precisa y reproducible.
- Columna cromatográfica: corazón de la separación, rellena de una fase estacionaria (sílice modificada, resinas de intercambio, etc.).
- Detector: UV/Vis, diodo array (DAD), fluorescencia, refractometría o acoplado con espectrometría de masas (HPLC-MS).
- Sistema de adquisición y procesamiento de datos: conversión de señales en cromatogramas utilizables.
La elección del modo cromatográfico depende de la naturaleza de la muestra y de los objetivos analíticos:
- Fase reversa (RP-HPLC) : la más común, con una fase estacionaria hidrófoba
- Fase normal , intercambio iónico , exclusión por tamaño , etc.
Características técnicas de la HPLC
- Rango de presión : hasta 400 bares
- Modos de separación : isocrático o gradiente
- Tipos de columnas : sílice C18, C8, intercambio iónico, permeación en gel, etc.
- Detectores : UV/Vis, DAD, fluorescencia, RI, MS
- Sensibilidad : Detección de trazas (ppm a ppb)
- Normas relacionadas : USP 621, Ph. Eur. 2.2.29, ICH Q2(R1)
¿Para qué matrices?
La cromatografía líquida de alto rendimiento es adecuada para una amplia gama de matrices:
Principales aplicaciones industriales
La HPLC se utiliza de forma rutinaria o en desarrollo en muchos sectores industriales:
Léa Géréec
Asesor técnico y científico
