Toxicidad subcrónica a los 90 días – OCDE 408
Descripción
El ensayo 408 es el estudio de referencia para caracterizar la toxicidad de una sustancia administrada por vía oral diariamente durante 90 días en roedores. Esta duración representa aproximadamente una décima parte de la esperanza de vida del animal: permite que se manifiesten efectos acumulativos, adaptaciones metabólicas y lesiones de evolución lenta.
Esta es la prueba que las agencias reguladoras esperan para establecer un NOAEL en una evaluación cuantitativa de riesgos. Su versión actual, revisada en 2018 y reeditada en 2025, incorpora una serie de medidas sensibles a la función endocrina, con especial atención a la función tiroidea.
Objetivo del análisis
El estudio subcrónico de 90 días persigue un objetivo que los ensayos más cortos no pueden alcanzar: producir un valor umbral lo suficientemente sólido como para servir de punto de partida para el cálculo de los valores límite de exposición ocupacional y los márgenes de seguridad.
- Determinar el NOAEL y el LOAEL con una potencia estadística adaptada a efectos de pequeña amplitud.
- Identificar con precisión los órganos diana y la naturaleza de las lesiones inducidas.
- Caracterizar la progresión de los efectos a lo largo del tiempo, y no su mera presencia.
- señales, hematológicas, neurológicas y oftalmológicas
- Documentar la reversibilidad mediante un grupo satélite mantenido sin tratamiento después de la exposición.
Metodología de la OCDE 408
| Pauta | OCDE 408 — Revisión de 2018, versión que se publicará en 2025 |
| Especies preferidas | Rata (otros roedores son posibles con justificación científica) |
| Vía administrativa | Vía oral: alimentación forzada, incorporación a los alimentos o al agua potable |
| Tiempo de exposición | 90 días, administración diaria |
| Grupos experimentales | Al menos 3 niveles de dosis + 1 grupo de control |
| Personal | 10 machos y 10 hembras por grupo, es decir, 20 animales |
| Prueba límite | Posible a una dosis de 1000 mg/kg de peso corporal por día |
| Grupo satélite | Opcional: 10 animales (5 de cada sexo), recuperación de al menos 14 días |
| Resultado del producto | NOAEL, LOAEL, órganos diana, relación dosis-respuesta, reversibilidad |
Duplicar el tamaño de la muestra en comparación con un estudio de 28 días no es una mera formalidad administrativa. Es lo que otorga al ensayo la potencia estadística necesaria para distinguir un efecto real de la variación biológica normal, precisamente el tipo de efecto discreto que pasa desapercibido en un estudio breve.
Parámetros evaluados
Seguimiento clínico : monitorización diaria de la mortalidad y la morbilidad, examen clínico semanal, pesaje y control de la ingesta de alimentos y líquidos durante las trece semanas.
Observaciones funcionales : reactividad a los estímulos y actividad motora, que permiten detectar daños neurológicos antes de que sean visibles histológicamente.
Examen oftalmológico : se realiza antes del inicio del ensayo y al finalizar el mismo.
Análisis biológicos : hematología y bioquímica clínica completas al finalizar la exposición.
Parámetros endocrinos : la revisión de 2018 introdujo medidas relacionadas con el sistema endocrino, centrándose principalmente en la función tiroidea. Estos datos constituyen una señal de alerta temprana integrada en un estudio general de toxicidad; no sustituyen las pruebas diseñadas específicamente para la disrupción endocrina, pero pueden impulsar su implementación.
Necropsia, pesaje de órganos e histopatología : examen macroscópico completo, seguido de una lectura histopatológica detallada en los grupos de control y de dosis alta, que se extiende a otros grupos cuando se encuentran lesiones.
Interpretación y consecuencias regulatorias
El NOAEL determinado por el ensayo 408 se incorpora directamente a dos procesos distintos: el cálculo de los valores de referencia para la evaluación de riesgos y la clasificación de la sustancia según el Reglamento CLP.
declaración de peligro STOT-RE (toxicidad específica para órganos diana, exposición repetida) se establecen con precisión sobre la base de un estudio de 90 días en ratas:
| Clasificación STOT-RE | Valor de referencia: estudio oral de 90 días (rata) |
|---|---|
| Categoría 1 | C ≤ 10 mg/kg p.c./día |
| Categoría 2 | 10 < C ≤ 100 mg/kg p.c./día |
A diferencia de un estudio de 28 días, cuyos resultados deben extrapolarse multiplicando los umbrales por tres, el ensayo 408 aplica directamente estos valores. Esta es una ventaja subestimada: elimina un paso de interpretación y, por lo tanto, una fuente de controversia para el evaluador.
¿Cuándo se requiere la norma OECD 408?
En virtud del reglamento REACH, el estudio subcrónico de 90 días se convierte en un requisito de notificación estándar cuando se supera el umbral de 100 toneladas anuales por registrante. Por debajo de este umbral, entre 10 y 100 toneladas, se aplica el estudio de 28 días.
También se prevé que esta prueba se incluya en los expedientes de aprobación de sustancias activas biocidas y fitofarmacéuticas, en las evaluaciones de aditivos para alimentos y piensos, y en la evaluación biológica de determinados dispositivos médicos.
¿Es necesario realizar previamente un análisis OECD 407?
Depende de lo que ya se sepa sobre la sustancia. Si no existen datos de dosis repetidas, un estudio preliminar —como un estudio OECD 407 de 28 días o un estudio de determinación de dosis— garantizará la correcta selección de los niveles de exposición para el estudio principal. Una dosis alta y mal calibrada que cause una mortalidad excesiva o, por el contrario, ningún efecto, invalida la interpretación del ensayo de 90 días.
Sin embargo, si su tonelaje lo sitúa desde el principio entre los 100 mayores productores anuales, combinar ambos estudios resulta más caro que solicitar directamente el ensayo 408 con una fase preliminar de investigación de dosis cortas.
Sectores y aplicaciones afectados
- Industria química : registro REACH para casos que superen las 100 toneladas anuales.
- Biocidas y productos fitosanitarios : expedientes de aprobación de sustancias activas.
- Nutracéuticos y complementos alimenticios : evaluación de la seguridad de nuevos ingredientes y expedientes de nuevos alimentos.
- Alimentación y salud animal : aditivos, premezclas y materias primas.
- Dispositivos médicos : evaluación biológica bajo exposición prolongada.
El sector cosmético constituye una excepción: dado que las pruebas en animales están prohibidas a efectos del Reglamento 1223/2009, esta prueba no puede realizarse con el fin de evaluar la seguridad de los cosméticos en la Unión Europea.
¿Por qué utilizar YesWeLab?
Un estudio de 90 días implica varios cientos de animales, entre seis y doce meses de planificación y un presupuesto considerable. No se puede repetir. La calidad del laboratorio y la pertinencia del diseño del estudio son los únicos dos factores que determinan si la inversión dará como resultado una aplicación viable.
Te ponemos en contacto con laboratorios asociados seleccionados por su dominio de las directrices de la OCDE. Nuestros socios operan de acuerdo con las Buenas Prácticas de Laboratorio, requisito indispensable para que el estudio sea aceptado en el expediente reglamentario.
Nuestro valor añadido reside en la fase previa al ensayo: arbitramos entre los 28 y los 90 días, elegimos la vía de exposición en función del escenario de exposición real, desarrollamos el plan de dosificación y anticipamos los parámetros que se integrarán desde la fase de diseño, en lugar de hacerlo a posteriori. Nuestra plataforma centraliza sus solicitudes, presupuestos e informes, con un único punto de contacto desde el intercambio inicial hasta la entrega del informe final.
Preguntas frecuentes
¿Qué plazo cabe esperar para un estudio OCDE 408?
La fase de exposición dura trece semanas. A continuación, se realiza la caracterización analítica de la sustancia, un posible estudio de determinación de dosis, un análisis histopatológico y la redacción del informe. Un plazo total de entre seis y doce meses es realista, dependiendo de la complejidad de la sustancia y la disponibilidad del laboratorio.
¿Puede un estudio de 28 días sustituir la norma 408 de la OCDE?
No, no cuando las regulaciones exigen 90 días. El tamaño reducido de la muestra y el corto período de observación del ensayo 407 no permiten detectar efectos de evolución lenta, y un resultado negativo en 28 días no constituye prueba de seguridad bajo exposición prolongada.
¿Qué ocurre si se observa un efecto en todas las dosis?
El estudio no permite establecer un NOAEL, sino únicamente un LOAEL. Esta situación suele reflejar un plan de dosificación demasiado alto y con frecuencia obliga a repetir el estudio, total o parcialmente; de ahí la importancia de una fase de calibración preliminar.
¿Cubre la prueba 408 la exposición por inhalación?
No. Es específico para la vía oral. Para la exposición principalmente respiratoria (polvos, aerosoles, sustancias volátiles), la directriz aplicable es la OECD 413 durante 90 días o la OECD 412 durante 28 días.
¿Son obligatorios los parámetros tiroideos?
La revisión de 2018 los incorporó a la guía. Se espera que estén presentes en un estudio que cumpla con la versión actual, y su ausencia puede dar lugar a una solicitud de información adicional por parte del evaluador.
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