Irritación ocular – OCDE 492b

La directriz 492B método de ensayo in vitro que utiliza epitelio corneal humano reconstituido (RhCE) paraidentificar riesgos oculares. Adoptada en 2022 y actualizada en junio de 2024, permite clasificar una sustancia o mezcla en una de las tres categorías de riesgo ocular del SGA (Sistema Globalmente Armonizado de ) —categoría 1 (daño ocular grave), categoría 2 (irritación ocular) o ninguna clasificación— a partir de una sola prueba, sin necesidad de experimentación con animales.

Esto es lo que la distingue radicalmente de la norma OECD492, su predecesora, que utiliza el mismo tipo de modelo de tejido pero solo permite descartar la clasificación, sin poder discriminar entre irritación y lesión grave.

El principio del "tiempo hasta la toxicidad": lo que lo cambia todo

Mientras que el 492 mide la viabilidad celular después de un único tiempo de exposición, el 492B se basa en un enfoque denominado "tiempo hasta la toxicidad" (TTT) : el producto se aplica al tejido corneal durante varias duraciones crecientesy la viabilidad se mide después de cada una.

La lógica es simple y biológicamente sólida: un producto que causa daño ocular grave destruye el tejido rápidamente, mientras que un simple irritante solo reduce la viabilidad tras una exposición prolongada. Es la cinética del daño, y no solo su etapa final, la que proporciona la información para la clasificación. Al comparar los resultados obtenidos en diferentes momentos, el modelo predictivo distingue entre las tres categorías.

Modelo de predicción: cómo interpretar el resultado

El modelo validado para esta guía es el SkinEthic™ HCE TTT (epitelio corneal humano reconstituido, protocolo de tiempo hasta la toxicidad), con dos protocolos distintos según la forma del producto.

Protocolo de líquidos

Las tres exposiciones del protocolo líquido se realizan con duraciones y concentraciones crecientes en cuanto a severidad: 5 minutos con el producto puro, luego 16 minutos y 120 minutos con una dilución de agua al 20% (p/v).

Protocolo sólido

Los productos sólidos se prueban en su forma pura, como polvo finamente molido, a los 30 y 120 minutos de exposición.

Cada ensayo incluye un control negativo y un control positivo, cuyos valores de viabilidad deben cumplir con los criterios de aceptación de la guía para que la serie sea validada.

Norma OECD 492 o OECD 492B: una comparación

Para obtener más información sobre esta opción, consulte nuestro artículo OECD 492 o 492B: ¿qué método elegir para evaluar la irritación ocular?

Ámbito de aplicación

La prueba OECD 492B se aplica tanto a sustancias como a mezclasy abarca una amplia gama de formas físicas: líquidos, sólidos, semisólidos y ceras. Esta versatilidad la convierte en un método especialmente adecuado para productos terminados formulados, que a menudo resultan difíciles de analizar mediante otros métodos.

Es relevante para:

• la industria cosmética — ingredientes y productos terminados — en el marco del Reglamento (CE) n.º 1223/2009, que prohíbe las pruebas en animales;
• sustancias químicas sujetas al reglamento REACH, para su registro y clasificación CLP;
• detergentes, limpiadores y productos de mantenimiento, cuyo perfil ocular influye directamente en el etiquetado;
• biocidas, en los archivos de autorización BPR;
• productos fitosanitarios y materias primas industriales.

¿Por qué elegir el examen 492B en lugar de una secuencia de pruebas?

Históricamente, clasificar un producto como de categoría 1 o 2 requería una serie de métodos: una prueba de exclusión, seguida de un ex vivo como OECD 437 (BCOP) o OECD 438 (ICE). Cada paso implicaba tiempo, costes e incertidumbre.

El modelo 492B hace innecesaria esta secuencia en muchos casos:

• Un solo ensayo, una sola clasificación : se acabó la espera entre dos etapas;
• Solo se proporciona una muestra, solo una configuración experimental;
• No se utiliza tejido de origen animal, a diferencia de BCOP (córneas bovinas) e ICE (ojos de pollo), un argumento que cobra cada vez más importancia en los expedientes de cosmética y en las políticas de RSC;
• un modelo de origen humano, por lo tanto, más relevante fisiológicamente para predecir la respuesta en humanos.

¿Por qué realizar este ensayo con YesWeLab?

• Laboratorios debidamente equipados : el método 492B es reciente; no todos los laboratorios de toxicología lo ofrecen. Trabajamos con aquellos que lo utilizan de forma rutinaria.
• El protocolo adecuado para su matriz —líquida, sólida, semisólida o cera—: la elección del protocolo y la preparación de la muestra determinan la validez del resultado. Definimos este punto antes del lanzamiento;
• Una estrategia de pruebas coherente : si su caso combina irritación ocular, irritación cutánea y corrosión, diseñamos la secuencia más económica en lugar de acumular estudios;
• Un informe que puede utilizarse directamente en sus expedientes REACH, CLP, de cosméticos o de biocidas;
• Un único punto de contacto y una solicitud de presupuesto centralizada, independientemente del número de laboratorios implicados.

Preguntas frecuentes

¿Cuál es la diferencia entre la norma OECD 492 y la OECD 492B?

La norma OECD 492 es un método de exclusión: solo permite identificar productos que no requieren clasificación. La norma OECD 492B, mediante su enfoque de exposición en múltiples momentos, distingue entre la categoría 1 (daño ocular grave), la categoría 2 (irritación) y la ausencia de clasificación en una sola prueba.

¿Puede la norma OECD 492B sustituir a la OECD 405 in vivo?

las pruebas in vitro son el único método permitido. Para otras normativas, el método 492B es un método independiente reconocido, que debe integrarse en un Enfoque Integrado de Pruebas y Evaluación (IATA). Su aceptación depende de la aplicación y de la autoridad competente; podemos ayudarle a definir este aspecto desde el principio.

Mi producto es una mezcla formulada. ¿Se puede analizar?

Sí. La guía abarca explícitamente las mezclas, incluidas las semisólidas o cerosas. Esta es, de hecho, una de sus principales ventajas sobre los métodos anteriores.

¿Cuánto dura el juicio?

La fase experimental dura varios días. El plazo total depende de la disponibilidad de los tejidos reconstituidos y del plan de pruebas elegido; se le comunicará claramente junto con el presupuesto.

¿Qué cantidad de producto se debe suministrar?

Por lo general, bastan unos pocos gramos o mililitros. La cantidad exacta depende del número de réplicas, del protocolo aplicable y de cualquier prueba preliminar de interferencia.

¿Qué ocurre si mi producto interfiere con la prueba MTT?

Los productos coloreados o aquellos que reducen espontáneamente el MTT pueden distorsionar la lectura. Esta interferencia es conocida y se aborda mediante controles adicionales descritos en la guía, siempre que se prevea. Por favor, infórmenos sobre cualquier coloración significativa al solicitar un presupuesto.

¿Está acreditada la sección 492B?

La acreditación se aplica al laboratorio, no a la metodología. Le informaremos sobre el alcance de la acreditación del laboratorio seleccionado para su estudio.

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Describa su producto, su forma física y su objetivo regulatorio. Identificaremos el laboratorio adecuado y le proporcionaremos un presupuesto detallado y una fecha límite definitiva.