Chromatographie liquide haute performance (HPLC)
La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est une méthode d’analyse physico-chimique de référence pour la séparation, l’identification et la quantification des composants d’un mélange complexe. Grâce à sa précision, sa reproductibilité et sa polyvalence, la HPLC est devenue un outil incontournable dans les secteurs pharmaceutique, cosmétique, agroalimentaire, chimique, environnemental et matériaux.
Qu'est-ce que la HPLC ?
La HPLC (High Performance Liquid Chromatography) est une technique de chromatographie qui repose sur la séparation des analytes d’un échantillon en fonction de leur interaction avec une phase stationnaire (colonne) et une phase mobile (solvant liquide). Elle permet d’identifier et de quantifier avec une grande sensibilité les constituants d’un mélange, même à l’état de traces.
L’échantillon est entraîné par un solvant sous haute pression à travers une colonne contenant une phase stationnaire. Chaque composé migre à une vitesse différente selon son affinité, générant un chromatogramme analysable par un détecteur (UV, fluorescence, MS…).
Fonctionnement de la chromatographie HPLC
Un système HPLC est constitué de plusieurs modules intégrés :
- Pompe haute pression : permet de faire circuler la phase mobile à travers la colonne (jusqu’à 400 bars).
- Injecteur d’échantillon : manuelle ou automatisée, l’injection doit être précise et reproductible.
- Colonne chromatographique : cœur de la séparation, remplie d’une phase stationnaire (silice modifiée, résines échangeuses…).
- Détecteur : UV/Vis, diode array (DAD), fluorescence, réfractométrie ou couplé à la spectrométrie de masse (HPLC-MS).
- Système d’acquisition et traitement des données : conversion des signaux en chromatogrammes exploitables.
Le choix du mode chromatographique dépend de la nature de l’échantillon et des objectifs analytiques :
- Phase inverse (RP-HPLC) : le plus courant, avec une phase stationnaire hydrophobe
- Phase normale, échange d’ions, exclusion stérique, etc.
Caractéristiques techniques de la HPLC
- Plage de pression : jusqu’à 400 bars
- Modes de séparation : isocratique ou gradient
- Types de colonnes : silice C18, C8, échange d’ions, gel perméation…
- Détecteurs : UV/Vis, DAD, fluorescence, RI, MS
- Sensibilité : détection de traces (ppm à ppb)
- Normes associées : USP 621, Ph. Eur. 2.2.29, ICH Q2(R1)
Pour quelles matrices ?
La chromatographie liquide haute performance s’adapte à une très large gamme de matrices :
Applications industrielles principales
La HPLC est utilisée en routine ou en développement dans de nombreux secteurs industriels :
Léa Géréec
Référente technique et scientifique