Toxicidad oral aguda – Prueba OCDE 420 (Método de dosis predeterminada)

La Directriz 420 de la OCDE describe un método alternativo para evaluar la toxicidad oral aguda, diseñado para reducir el número de animales utilizados y evitar depender únicamente de la mortalidad como criterio de valoración. Basado en la administración de dosis predeterminadas a un solo sexo (generalmente hembras), permite la clasificación rápida de una sustancia según las normas SGA/CLP sin requerir una DL50 exacta. Este enfoque está reconocido por las autoridades reguladoras (REACH/CLP) y se integra fácilmente en los requisitos de BPL/BPL, con un informe directamente utilizable en IUCLID.

Objetivos y alcance del ensayo

El estudio OCDE 420 proporciona la información necesaria para la evaluación de riesgos tras una única exposición oral y para la clasificación SGA/CLP en toxicidad aguda. Su objetivo es determinar el rango de toxicidad relevante limitando la exposición a dosis moderadamente tóxicas. El estudio está indicado para el registro REACH, expedientes biocidas o fitosanitarios, transporte/cumplimiento de las Naciones Unidas y, en general, para la comunicación de peligros y la evaluación de riesgos de los productos.

Principio metodológico

El método se basa en dosis fijas de 5, 50, 300 y 2000 mg/kg de peso corporal (con, excepcionalmente y con la debida justificación, 5000 mg/kg). La dosis inicial se elige con base en un estudio preliminar y la información disponible (propiedades fisicoquímicas, datos in vitro/in vivo, QSAR, análogos). El objetivo es obtener signos claros de toxicidad sin causar efectos adversos graves ni mortalidad. Dependiendo de la respuesta observada (ausencia de toxicidad, toxicidad manifiesta, mortalidad), la secuencia continúa con la siguiente dosis, superior o inferior, hasta que se pueda asignar una categoría del SGA. El método prioriza la reducción del sufrimiento animal evitando dosis con un alto grado de corrosión o irritación y aplicando límites humanitarios.

Procedimiento experimental

Los animales son adultos jóvenes sanos (preferiblemente ratas), hembras nulíparas no gestantes, aclimatadas durante al menos cinco días. Los sujetos ayunan antes de la sonda gástrica y la sustancia se administra en una dosis única (que puede dividirse en 24 horas si es necesario) a través de una sonda gástrica. Los volúmenes se controlan (típicamente ≤ 1 mL/100 g, hasta 2 mL/100 g para soluciones acuosas), y el agua es el vehículo preferido siempre que sea posible. Después de la administración, los animales son monitoreados durante al menos 14 días, con observación cercana en las primeras horas, luego diariamente. Los parámetros monitoreados incluyen signos clínicos (respiratorios, neurológicos, conductuales), la aparición de toxicidad local/sistémica, mortalidad, pesos corporales (antes de la dosis y luego al menos semanalmente) y, al final del estudio, un examen macroscópico sistemático (e histología dirigida si es necesario).

Evaluación y selección de la dosis inicial

El estudio piloto utiliza un animal por nivel de dosis (5, 50, 300, 2000 mg/kg), con un intervalo de al menos 24 horas entre sujetos, hasta determinar la dosis inicial más informativa para el estudio principal. En ausencia de información, se suele recomendar 300 mg/kg. Si se produce mortalidad con 5 mg/kg, se puede iniciar un procedimiento de confirmación, administrando secuencialmente la misma dosis a un número limitado de animales para confirmar la categoría más grave, y suspendiendo el procedimiento inmediatamente si se produce una segunda muerte.

Estudio principal, niveles y tamaño del grupo

El estudio primario suele incluir cinco animales con la dosis considerada (incluido el animal piloto ya tratado con esa misma dosis). Tras la primera dosis, existen tres vías de administración según la respuesta observada: clasificación directa, administración de la dosis más baja o administración de la dosis más alta. Por motivos de bienestar, no se repite una dosis que haya provocado mortalidad durante la fase piloto. El intervalo entre grupos (a menudo de 3 a 4 días) puede ajustarse para detectar cualquier efecto retardado. Si se prevé una baja toxicidad, se puede realizar un ensayo con una dosis límite de 2000 mg/kg (excepcionalmente, 5000 mg/kg si lo exige la normativa y existe un claro beneficio para la salud).

Observaciones, criterios humanitarios y patología

Se realizan observaciones al menos una vez dentro de los primeros 30 minutos, regularmente durante las primeras 24 horas y luego diariamente hasta el día 14 (o más tiempo si la toxicidad se retrasa). Los animales moriformes o con sufrimiento severo se sacrifican y se tienen en cuenta en la interpretación. Se monitorea el peso individualmente (antes de la dosis, luego semanalmente) y se documentan los cambios. Se realiza la necropsia de todos los animales (fallecidos o sobrevivientes); se pueden realizar exámenes histopatológicos específicos en caso de lesiones evidentes.

Datos, clasificación y entregables

Los resultados se presentan individualmente y se resumen por dosis: número de animales, signos de toxicidad (naturaleza, intensidad, momento, reversibilidad), mortalidad y tiempo de aparición, peso y lesiones macro/histológicas. La clasificación GHS/CLP se asigna en función de las respuestas observadas en umbrales predeterminados, sin necesidad de una estimación de la DL50. El informe del estudio documenta la sustancia (identidad, pureza, lote), el vehículo, la formulación, las condiciones de alojamiento, la justificación de la dosis inicial, los métodos de administración, las tablas de resultados, la discusión y las conclusiones. En BPL/BPL, se proporciona garantía de calidad, trazabilidad, archivo y un formato conforme a IUCLID.

Puntos fuertes del método OCDE 420

El procedimiento ofrece una clasificación robusta, a la vez que reduce el número de animales y su sufrimiento en comparación con los métodos tradicionales de LD50. Es especialmente adecuado cuando el objetivo regulatorio es la categorización rápida según el SGA/CLP y aboga por una estrategia de escalamiento cautelosa, alineada con los principios de las 3R. Se integra fácilmente con estrategias de prescindencia o referencia cruzada con datos existentes (in vitro, QSAR, análogos), limitando las pruebas in vivo a casos justificados.

Soporte de YesWeLab

YesWeLab coordina sus ensayos OCDE 420 con laboratorios asociados acreditados (BPL, ISO 17025). Le ayudamos a definir la estrategia de dosificación (objetivo, meseta inicial), seleccionar el vehículo y documentar la justificación científica. Se beneficia de la monitorización digital, un riguroso control de calidad y un informe completo compatible con IUCLID, utilizable en expedientes de REACH/CLP, biocidas o productos fitosanitarios.

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